การทำให้ไวรัสโรตาในมนุษย์และลิงหมดฤทธิ์ด้วยคลอรีนไดออกไซด์

หน้าหลักนี้ประกอบด้วยเอกสารฉบับแปลของบทความวิชาการต้นฉบับ อย่างไรก็ตาม เรา ได้จัดทำสรุปเนื้อหาที่สำคัญแบบย่อยง่ายไว้ให้ผู้อ่านได้ศึกษาเป็นลำดับแรก เพื่อให้เข้าใจภาพรวมของงานวิจัยชิ้นนี้ได้อย่างรวดเร็ว หากท่านมีความสนใจในรายละเอียดเชิงลึกหรือข้อมูลทางสถิติเพิ่มเติม ท่านสามารถเลือกอ่านเอกสารฉบับเต็มได้ทั้งในรูปแบบภาษาอังกฤษ (Original) ได้ที่ลิงก์นี้: https://journals.asm.org/doi/10.1128/aem.56.5.1363-1366.1990หรือหากต้องการอ่านฉบับภาษาไทย (Translated) เราได้จัดทำบทแปลไว้ให้แล้วในหน้านี้ (ล่างสุด)

งานวิจัยเรื่อง Inactivation of human and simian rotaviruses by chlorine dioxide เป็นการศึกษาประสิทธิภาพของ chlorine dioxide ในการทำลายไวรัสโรตา (ทั้งชนิดมนุษย์และลิง) โดยทำการทดลองในสภาวะควบคุม พบว่า chlorine dioxide สามารถทำให้ไวรัสสูญเสียความสามารถในการติดเชื้อได้อย่างรวดเร็ว โดยเฉพาะในสภาวะเป็นด่าง ซึ่งสามารถลดปริมาณไวรัสได้อย่างมากภายในเวลาเพียงไม่กี่วินาทีที่ความเข้มข้นต่ำ (ประมาณ 0.05–0.2 mg/L) นอกจากนี้ประสิทธิภาพในการยับยั้งไวรัสยังขึ้นอยู่กับค่า pH และระยะเวลาในการสัมผัส โดยในสภาวะเป็นกลางประสิทธิภาพจะลดลงเล็กน้อย ผลการศึกษาชี้ให้เห็นว่า chlorine dioxide เป็นสารฆ่าเชื้อที่มีประสิทธิภาพสูงต่อไวรัสในน้ำ และมีศักยภาพในการประยุกต์ใช้ด้านการควบคุมเชื้อจุลชีพในสิ่งแวดล้อมและระบบน้ำ

ข้อมูลการเผยแพร่

• ชื่อบทความ: Inactivation of human and simian rotaviruses by chlorine dioxide
• ผู้เขียน: Y. S. Chen และ J. M. Vaughn
• ปีที่ตีพิมพ์: 1990
• วารสาร: Applied and Environmental Microbiology

บทคัดย่อ

ได้ทำการศึกษาการทำลายเชื้อโรตาไวรัสชนิดอนุภาคเดี่ยวของมนุษย์ (ชนิดที่ 2, Wa) และลิง (SA-11) ด้วยคลอรีนไดออกไซด์ การทดลองดำเนินการที่อุณหภูมิ 4°C ในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต-คาร์บอเนตมาตรฐาน พบว่าไวรัสทั้งสองชนิดถูกทำลายอย่างรวดเร็วภายใน 20 วินาที ภายใต้สภาวะด่าง เมื่อใช้ความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์ในช่วง 0.05 ถึง 0.2 มิลลิกรัมต่อลิตร การลดความสามารถในการก่อโรคลง 105 เท่า ต้องใช้เวลาสัมผัสเพิ่มเติมอีก 120 วินาที ที่ความเข้มข้น 0.2 มิลลิกรัมต่อลิตรสำหรับ Wa และ 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตรสำหรับ SA-11 ตามลำดับ ที่ pH 6.0 การทำลายไวรัสทั้งสองชนิดอยู่ในระดับปานกลางที่ pH เป็นกลาง และความไวต่อคลอรีนไดออกไซด์ก็คล้ายคลึงกัน การสังเกตพบว่าประสิทธิภาพในการฆ่าเชื้อไวรัสเพิ่มขึ้นเมื่อค่า pH สูงขึ้น ซึ่งขัดแย้งกับผลการศึกษาในอดีตเกี่ยวกับอนุภาคไวรัสโรตาที่ผ่านการบำบัดด้วยคลอรีนและโอโซน โดยที่ประสิทธิภาพลดลงเมื่อความเป็นด่างเพิ่มขึ้น การเปรียบเทียบเวลาในการทำลายไวรัส 99.9% พบว่าโอโซนเป็นสารฆ่าเชื้อไวรัสที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดในบรรดาสารฆ่าเชื้อทั้งสามชนิดนี้

บทนำ

ไวรัสโรตาของมนุษย์ (HRV) ซึ่งเป็นสมาชิกของตระกูล Reoviridae ของไวรัส RNA เป็นสาเหตุของกรณีโรคท้องร่วงเฉียบพลันระบาดหรือโรคประจำถิ่นที่รายงานจำนวนมาก ซึ่งส่งผลกระทบต่อทั้งเด็กและผู้ใหญ่ จำนวนรายงานที่เพิ่มขึ้นซึ่งเชื่อมโยงไวรัสโรตากับสถานการณ์ทางคลินิกใหม่ๆ เน้นย้ำถึงความจำเป็นในการทำความเข้าใจระบาดวิทยาและการแพร่กระจายของไวรัสเหล่านี้ เนื่องจากสิ่งมีชีวิตเหล่านี้อาจแพร่กระจายผ่านสิ่งแวดล้อมทางน้ำ จึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องตรวจสอบประสิทธิภาพของวิธีการฆ่าเชื้อในน้ำต่างๆ ในการทำให้ไวรัสโรตาไม่ทำงาน

โดยทั่วไป การศึกษาประสิทธิภาพการฆ่าเชื้อในน้ำในห้องปฏิบัติการมักมุ่งเน้นไปที่สารฆ่าเชื้อที่ใช้กันทั่วไป เช่น คลอรีนและโอโซน แต่การศึกษาล่าสุดได้กล่าวถึงศักยภาพในการยับยั้งของสารอื่นๆ เพิ่มเติม รวมถึงคลอรีนไดออกไซด์ ซึ่งพบว่าเป็นสารฆ่าเชื้อแบคทีเรีย และสปอร์ ที่มีประสิทธิภาพ รวมถึงเป็นสารฆ่าเชื้อไวรัสที่มีศักยภาพ

นอกจากนี้ การใช้คลอรีนไดออกไซด์เป็นสารฆ่าเชื้อในน้ำยังไม่ก่อให้เกิดไตรฮาโลมีเทน ซึ่งเป็นปัญหาที่เกี่ยวข้องกับการบำบัดน้ำดื่มด้วยคลอรีน Scarpino et al. รายงานว่าคลอรีนไดออกไซด์สามารถยับยั้งไวรัสโปลิโอชนิดที่ 1 และเอนเทอโรไวรัสได้อย่างมีประสิทธิภาพมากขึ้นที่ pH 9.0 มากกว่าที่ระดับความเป็นกรดหรือเป็นกลาง มีการสาธิตผลกระทบของ pH ที่คล้ายกันในการทดลองอื่นๆ กับไวรัสโปลิโอ และไวรัสโรตาซิเมียน SA-11 จนถึงปัจจุบัน หลักฐานที่บันทึกไว้เพียงอย่างเดียวเกี่ยวกับการยับยั้งไวรัสโรตาของมนุษย์ด้วยคลอรีนไดออกไซด์คือรายงานโดย Harakeh และ Butler ในการทดลองเหล่านี้ พบว่าไวรัสโรตาของมนุษย์ที่แขวนลอยอยู่ในน้ำเสียมีความไวต่อการบำบัดด้วยคลอรีน คลอรีนไดออกไซด์ โอโซน และกรดเปอร์อะซิติกน้อยกว่าสายพันธุ์ลิงเล็กน้อย

ในการศึกษาปัจจุบันนี้ ได้ทำการเปรียบเทียบการยับยั้งเชื้อโรตาไวรัสสายพันธุ์ลิง (SA-1l) และ HRV ที่เป็นอนุภาคเดี่ยวบริสุทธิ์ด้วยคลอรีนไดออกไซด์ในช่วงความเข้มข้นของสารฆ่าเชื้อและระดับ pH ต่างๆ จากนั้นจึงเปรียบเทียบข้อมูลที่ได้กับข้อมูลจากการศึกษาครั้งก่อนๆ เกี่ยวกับการยับยั้งเชื้อโรตาไวรัสด้วยสารฆ่าเชื้อแบบดั้งเดิม เช่น คลอรีนและโอโซน

เครื่องมือและวิธีการ

ไวรัสโรตาซิเมียน SA-11 ที่ได้รับจาก Charles Gerba มหาวิทยาลัยแอริโซนา ทูซอน และ HRV ชนิด 2 (Wa) ที่ซื้อจาก Biotech Research Laboratories ร็อกวิลล์ แมริแลนด์ ถูกนำมาใช้ในการศึกษาทั้งหมด เซลล์เพาะเลี้ยงโฮสต์ (MA-104) ซื้อจาก Microbiological Associates วอล์กเกอร์สวิลล์ แมริแลนด์ การขยายพันธุ์ การทำให้บริสุทธิ์ และการทดสอบไวรัส ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ สารละลายสต็อกคลอรีนไดออกไซด์เตรียมในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต-คาร์บอเนตที่ปราศจากคลอรีนตามวิธีการของ Benarde et al. โดยสารละลายสด (ความเข้มข้นโดยประมาณ 200 มก./ลิตร) เก็บที่อุณหภูมิ 4°C ในขวดแก้วสีเข้มปิดสนิทได้นานถึง 2 สัปดาห์ ความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์ถูกกำหนดโดยวิธีการของ Roller et al.โดยวัด A357 ในสเปกโตรโฟโตมิเตอร์แบบลำแสงคู่ (รุ่น Acta III; Beckman Instruments, Inc., Ful-lerton, Calif.)

ก่อนการทดลองแต่ละครั้ง สารละลายสต็อกคลอรีนไดออกไซด์จะถูกเจือจางให้มีความเข้มข้นที่ต้องการด้วยบัฟเฟอร์ที่ปราศจากคลอรีนไดออกไซด์ จากนั้นจึงเติมสารละลายบัฟเฟอร์ที่มีคลอรีนไดออกไซด์ปริมาตร 100 มิลลิลิตร ร่วมกับไวรัสแบบอนุภาคเดี่ยวที่ผ่านการไดอะไลซิส 1 มิลลิลิตร (_107 PFU/ml) และผสมเบาๆ ด้วยเครื่องกวนแม่เหล็ก เก็บตัวอย่าง (10 มิลลิลิตรต่อตัวอย่าง) เป็นระยะๆ และใส่ในหลอดทดลองที่มีโซเดียมไทโอซัลเฟต 0.5 M ปริมาตร 0.1 มิลลิลิตร เพื่อหยุดปฏิกิริยา จากนั้นตัวอย่างทั้งหมดจะถูกบำบัดด้วยคลอโรฟอร์ม 0.5 มิลลิลิตร เป็นเวลา 10 นาที เพื่อกำจัดสิ่งปนเปื้อนจากจุลินทรีย์ เจือจางในสารละลายบัฟเฟอร์ Tris และทำการทดสอบตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้

เพื่อตรวจสอบว่าเซลล์โฮสต์มีความไวต่อไวรัสและปราศจากสิ่งปนเปื้อน จึงได้รวมตัวควบคุมโรตาไวรัสที่เป็นบวกและลบไว้ในการทดลองแต่ละครั้ง การทดลองแต่ละครั้งทำซ้ำหลายครั้ง (โดยปกติสองถึงสามครั้ง) เพื่อให้แน่ใจว่าผลลัพธ์มีความสอดคล้องกัน ข้อมูลได้รับการวิเคราะห์ทางสถิติตามวิธีการที่อธิบายโดย Sokal และ Rohlf และ Steel และ Torrie การวิเคราะห์ทางสถิติและกราฟิกดำเนินการบนคอมพิวเตอร์ Macintosh SE ด้วยซอฟต์แวร์ทางสถิติที่ตั้งโปรแกรมไว้ล่วงหน้า

ผลลัพธ์

ความเข้มข้นของสารละลายคลอรีนไดออกไซด์ที่เก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 4°C มีความคงที่นาน 10 นาที การสลายตัวของคลอรีนไดออกไซด์ในระหว่างการทดลองแต่ละครั้ง (สูงสุด 10 นาที) มีค่าเฉลี่ย 0.02 มิลลิกรัมต่อลิตร ปริมาณคลอรีนไดออกไซด์ที่เหลืออยู่ทั้งหมดที่รายงานด้านล่างนี้ คือค่าที่วัดได้ทันทีก่อนการทดลองแต่ละครั้ง จุดข้อมูลบนแต่ละเส้นโค้งคือค่ามัธยฐานของการทดลองหลายครั้งที่แยกจากกัน

ภาพที่ 1 การทำให้เชื้อ SA-11 ไม่ทำงานโดยคลอรีนไดออกไซด์ที่ pH 6.0 ความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์ในหน่วยมิลลิกรัมต่อลิตรมีดังนี้: 0, 0.05; A, 0.3; และ A, 0.5 Nt/No คือ จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาที่กำหนด / จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาศูนย์

ผลการศึกษาการยับยั้งเชื้อ SA-11 ที่ค่า pH 6 และ 7 แสดงในรูปที่ 1 และ 2 ที่ระดับค่า pH เหล่านี้ SA-11 ค่อนข้างทนต่อการบำบัดด้วยคลอรีนไดออกไซด์ที่ความเข้มข้นสูงถึง 0.17 มิลลิกรัม/ลิตร เมื่อเพิ่มความเข้มข้นของสารฆ่าเชื้อเป็น 0.5 มิลลิกรัม/ลิตร เวลาในการลดจำนวนไวรัสลง 105 เท่าลดลงเหลือ 2 นาที (pH 6) และ 30 วินาที (pH 7) การยับยั้งเชื้อ HRV ด้วยคลอรีนไดออกไซด์อยู่ในระดับปานกลางที่ค่า pH เป็นกรดและเป็นกลาง โดยต้องใช้ความเข้มข้นของสารฆ่าเชื้อ 0.2 มิลลิกรัม/ลิตร เพื่อให้เกิดการลดจำนวนเชื้อลง 105 เท่าภายใน 2 นาทีที่ pH 6 (ภาพที่ 3) และภายใน 3 นาทีที่ pH 7 (ภาพที่ 4) การยับยั้งไวรัสทั้งสองชนิดมีความคล้ายคลึงกันที่ค่า pH เป็นกลาง ในขณะที่ HRV ดูเหมือนจะไวต่อ pH 6.0 มากกว่าเล็กน้อย

ไวรัสโรตาของมนุษย์และลิงถูกทำให้ไม่ทำงานอย่างรวดเร็วที่ pH 8 (ภาพที่ 5) โดยมีสารตกค้าง 0.2 มิลลิกรัมต่อลิตร ทำให้เกิดการไม่ทำงานอย่างสมบูรณ์ (ลดลง 105 PFU) ภายใน 15 วินาที การเพิ่มประสิทธิภาพการฆ่าเชื้อด้วย pH ที่เพิ่มขึ้นนี้ตรงกันข้ามกับปรากฏการณ์ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับคลอรีนและโอโซน

ภาพที่ 2 การยับยั้งเชื้อ SA-11 ด้วยคลอรีนไดออกไซด์ที่ pH 7.0 ความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์ในหน่วยมิลลิกรัมต่อลิตรมีดังนี้: 0, 0.11; K, 0.17; *, 0.40; และ El, 0.6 Nt/No คือ จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาที่กำหนด / จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาศูนย์

ภาพที่ 3 การทำให้ไวรัส HRV ไม่ทำงานโดยคลอรีนไดออกไซด์ที่ pH 6.0 ความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์ในหน่วยมิลลิกรัมต่อลิตรมีดังนี้: V, 0.15; และ *, 0.20 Nt/No, จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาที่กำหนด / จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาศูนย์

ข้อมูลจากการศึกษาปัจจุบันถูกนำมาเปรียบเทียบกับข้อมูลจากการศึกษาครั้งก่อนๆ เกี่ยวกับการยับยั้งไวรัสโรตาไวรัสด้วยคลอรีนและโอโซน ซึ่งใช้เงื่อนไขการทดลองที่เหมือนกัน ข้อมูลเปรียบเทียบแสดงอยู่ในตารางที่ 1 เวลาในการยับยั้งไวรัส 3 ล็อก (99.9%) ได้มาจากการลากเส้นขนานกับแกน x (เวลา) จากแกน y (Nt/No, จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาที่กำหนด/จำนวนนั้น ณ เวลาศูนย์) ไปยังจุดตัดกับเส้นโค้งการยับยั้งแต่ละเส้น แล้วจึงระบุตำแหน่งจุดที่สอดคล้องกันบนแกน x

การเปรียบเทียบโดยตรงของเวลาการยับยั้ง 99.9% ที่ความเข้มข้นของโอโซนและคลอรีนเทียบกับคลอรีนไดออกไซด์นั้นมีความซับซ้อนเนื่องจากความแปรปรวนที่เกิดจากการเจือจางในการเตรียมสารละลายคลอรีนไดออกไซด์ อย่างไรก็ตาม มีแนวโน้มทั่วไปหลายประการที่เห็นได้ชัด ในขณะที่คลอรีนดูเหมือนจะมีประสิทธิภาพมากกว่าเล็กน้อยในการต่อต้าน SA-li ที่ pH 7.0 โอโซนเป็นสารฆ่าเชื้อไวรัสที่มีศักยภาพมากที่สุดโดยรวม ประสิทธิภาพของคลอรีนไดออกไซด์ค่อนข้างต่ำที่ pH เป็นกรดและเป็นกลาง อย่างไรก็ตาม ภายใต้สภาวะที่เป็นด่าง ประสิทธิภาพในการฆ่าเชื้อไวรัสของมันเพิ่มขึ้นจนเทียบเท่ากับโอโซน

การอภิปราย

ประสิทธิภาพในการยับยั้งไวรัสด้วยคลอรีนไดออกไซด์เป็นหัวข้อของการวิจัยในห้องปฏิบัติการหลายครั้ง จนถึงปัจจุบัน ยังไม่มีการใช้สารเตรียมไวรัสที่บริสุทธิ์ และมีเพียงหนึ่งเดียว ที่กล่าวถึงการยับยั้ง HRV

ภาพที่ 4 การทำให้ไวรัส HRV ไม่ทำงานโดยคลอรีนไดออกไซด์ที่ pH 7.0 ความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์ในหน่วยมิลลิกรัมต่อลิตรมีดังนี้: 0, 0.1; และ *, 0.2 Nt/No, จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาที่กำหนด / จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาศูนย์ APPL. ENVIRON. MICROBIOL.

ภาพที่ 5 (A) การทำให้เชื้อ SA-11 ไม่ทำงานโดยคลอรีนไดออกไซด์ที่ pH 8.0 (B) การทำให้เชื้อ HRV ไม่ทำงานโดยคลอรีนไดออกไซด์ที่ pH 8.0 ความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์ในหน่วยมิลลิกรัมต่อลิตรมีดังนี้: 0, 0.05; *, 0.20; และ 0, 0.10 Nt/No, จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาที่กำหนด / จำนวน PFU ของไวรัส ณ เวลาศูนย์

ในการศึกษาปัจจุบัน ไวรัสโรตาซิเมียนและไวรัส HRV ถูกนำไปสัมผัสกับความเข้มข้นของคลอรีนไดออกไซด์และระดับ pH ต่างๆ ที่อุณหภูมิ 4°C ในระบบบัฟเฟอร์ที่ปราศจากความต้องการคลอรีน โดยอนุภาคเดี่ยวๆ ของไวรัสทั้งสองชนิดถูกทำลายอย่างมีประสิทธิภาพมากที่สุดที่ pH 8 โดยสารตกค้าง 0.2 มิลลิกรัมต่อลิตรสามารถลดความสามารถในการก่อโรคได้ 10 เท่าภายใน 15 วินาที การเพิ่มประสิทธิภาพการฆ่าเชื้อด้วยคลอรีนไดออกไซด์ในสภาวะด่างที่คล้ายกันนี้เคยมีการรายงานมาก่อนแล้วสำหรับไวรัสโปลิโอ เอนเทอโรไวรัส และไวรัสโรตา SA-11 ประสิทธิภาพการฆ่าเชื้อลดลงอย่างมากเมื่อลด pH ลงเหลือ 6.0 แม้ว่าจะพบความแตกต่างบางประการในความไวสัมพัทธ์ของไวรัสที่ใช้ทดสอบต่อการท้าทายด้วยคลอรีนไดออกไซด์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ pH 6.0 ซึ่งต้องใช้สารฆ่าเชื้อมากกว่าสองเท่าเพื่อให้ความสามารถในการก่อโรคของ SA-11 ลดลง 105 เท่าภายใน 120 วินาที แต่ความแตกต่างเหล่านี้ไม่ถือว่ามีนัยสำคัญในบริบทของการศึกษาทั้งหมด

ตารางที่ 1 เวลาโดยประมาณสำหรับการยับยั้งเชื้อ SA-11 และ HRV ได้ 99.9% ด้วยคลอรีน โอโซน และคลอรีนไดออกไซด์ ที่อุณหภูมิ 4°C

a จาก Vaughn et al.

b จาก Vaughn et al.

c เวลาที่ระบุเท่ากับระยะเวลาของการทดลองแต่ละครั้ง

d ค่า 6.0 วินาทีแสดงถึงเวลาที่สั้นที่สุดที่สามารถประมาณได้จากเส้นโค้งการปิดใช้งาน เนื่องจากในการทดลองเหล่านี้ การปิดใช้งาน 105 เท่าใช้เวลา 10 วินาที ดังนั้นการลดลง 99.9o ที่แท้จริงจึงน่าจะน้อยกว่า 6 วินาที

กิตติกรรมประกาศ

งานวิจัยนี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุน R-809489-01 จากสำนักงานคุ้มครองสิ่งแวดล้อมแห่งสหรัฐอเมริกา โดยมี Donald Carey เป็นเจ้าหน้าที่โครงการ เราขอขอบคุณ Philip Manfre, Beth Soul’e และ Deborah Morales สำหรับความพยายามในการดำเนินงานวิจัยนี้ และ Lois J. Baranosky, Anne G. Savitt และ Susan Moger สำหรับการเตรียมต้นฉบับ

เอกสารอ้างอิง

1. Alvarez, M. E., และ R. T. O’Brien. 1982. กลไกการยับยั้งไวรัสโปลิโอโดยคลอรีนไดออกไซด์และไอโอดีน Appl.Environ. Microbiol. 44:1064-1071.

2. Benarde, M. A., B. M. Israel, V. P. Olivieri, และ M. L.Granstrom. 1965. ประสิทธิภาพของคลอรีนไดออกไซด์ในฐานะสารฆ่าเชื้อแบคทีเรีย Appl. Microbiol. 13:776-780.

3. Berman, D., และ J. Hoff. 1984. การยับยั้งไวรัสโรตาในลิง SA-11 โดยคลอรีน คลอรีนไดออกไซด์ และโมโนคลอรามีน Appl.Environ. Microb. 48:317-323.

4. Bryden, A. S., H. A. Davies, R. C. Hudley, T. H. Flewett, C. A. Morris และ P. Oliver. 1975. โรคลำไส้อักเสบจากไวรัสโรตาในเวสต์มิดแลนด์ระหว่างปี 1974. Lancet u:241-243.

5. Estes, M. K., E. L. Palmer และ J. F. Obijeski. 1983. ไวรัสโรตา: บททบทวน. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 105:123-184.

6. Halvorsrud, J. และ I. Orstavik. 1980. การระบาดของโรคกระเพาะและลำไส้อักเสบที่เกี่ยวข้องกับไวรัสโรตาในบ้านพักคนชรา. Scand. J. Infect. Dis. 12:161-164.

7. Harakeh, M. และ M. Butler. 1984. การทำให้ไวรัสโรตาในมนุษย์, SAl1 และไวรัสในลำไส้อื่นๆ ไม่ทำงานด้วยสารฆ่าเชื้อในน้ำเสีย J. Hyg. 93:157-163.

8. Holzel, H., D. W. Cubitt, D. A. McSwiggan, P. J. Sanderson และ J. Church. 1980. การระบาดของการติดเชื้อไวรัสโรตาในผู้ใหญ่ในหอผู้ป่วยโรคหัวใจ J. Infect. 2:33-37.

9. Hung, T., G. Chen, C. Wang, H. Yao, Z. Fang, T. Chao, Z. Chou, W. Ye, X. Chang, S. Den, X. Liang และ W. Chang. 1984. การระบาดของโรคท้องร่วงจากไวรัสโรตาในผู้ใหญ่ในประเทศจีนที่เกิดจากไวรัสโรตาสายพันธุ์ใหม่ Lancet i:1139-1142.

10. Linhares, A. C., F. P. Pinheiro, R. B. Freitas, Y. B. Gabbay, J. A. Shirley และ G. M. Beards. 1981. การระบาดของโรคท้องร่วงจากไวรัสโรตาในชุมชนชาวอินเดียนแดงอเมริกาใต้ที่ไม่มีภูมิคุ้มกันและถูกแยกตัว Am. J. Epidemiol. 113:703-709.

11. Matthews, R. E. F. 1979. การจำแนกและการตั้งชื่อไวรัส สรุปผลการประชุมของคณะกรรมการระหว่างประเทศว่าด้วยการจำแนกประเภทไวรัส ณ กรุงเฮก เดือนกันยายน 1978 Intervirology 11:133-135.

12. Meurman, O. H. และ M. J. Laine. 1977. การระบาดของไวรัสโรตาในผู้ใหญ่ N. Engl. J. Med. 296:1298-1299.

13. Ridenour, G. M., R. S. Ingols และ E. H. Armbruster. 1949. คุณสมบัติในการฆ่าสปอร์ของคลอรีนไดออกไซด์. Water Sewage Works 96:279-283.

14. Roller, S. D., V. P. Olivieri และ K. Kawata. 1980. วิธีการยับยั้งแบคทีเรียโดยคลอรีนไดออกไซด์. Water Res. 14:635-641. เล่มที่ 56, 1990

15. Scarpino, P. V., F. A. 0. Brigano, S. Cronier และ M. L. Zink. 1979. เอกสารเผยแพร่ของสำนักงานคุ้มครองสิ่งแวดล้อมแห่งสหรัฐอเมริกา หมายเลข EPA-600/2-79-054 สำนักงานคุ้มครองสิ่งแวดล้อมแห่งสหรัฐอเมริกา ซินซินเนติ โอไฮโอ

16. Schnoor, J. L., J. L. Nitzschke, R. D. Lucas และ J. N. Veenstra. 1979. ผลผลิตไตรฮาโลมีเทนเป็นฟังก์ชันของน้ำหนักโมเลกุลของสารตั้งต้น Environ. Sci. Technol. 13:1134-1138

17. Sokal, R. R. และ F. J. Rohif. 1969. ชีวสถิติ W.H. Freeman &Co., ซานฟรานซิสโก

18. Steel, R. G. D. และ J. H. Torrie. 1960. หลักการและขั้นตอนของสถิติ McGraw-Hill Book Co., นิวยอร์ก

19. Vaughn, J. M., Y. S. Chen, K. Lindburg และ D. Morales 1987. การทำให้ไวรัสโรตาของมนุษย์และลิงไม่ทำงานโดยโอโซน Appl.ENVIRON. MICROBIOL. 53:2218-2221

20. Vaughn, J. M., Y. S. Chen และ M. Z. Thomas 1986. การทำให้ไวรัสโรตาของมนุษย์และลิงไม่ทำงานโดยคลอรีน Appl.ENVIRON. MICROBIOL. 51:391-394

21. von Bonsdorff, C. H., T. Hovi, A. P. Makela, L. Hovi และ M.Tevalvoto-Aarnio 1976. โรตาไวรัสที่เกี่ยวข้องกับโรคกระเพาะและลำไส้อักเสบเฉียบพลันในผู้ใหญ่ Lancet ii:423.

22. Yolken, R. H., C. A. Bishop, T. R. Townsend, E. A. Bolyard, J.Bartlett, G. W. Santos และ R. Saral. 1982. โรคกระเพาะและลำไส้อักเสบจากการติดเชื้อในผู้รับการปลูกถ่ายไขกระดูก N. Engl. J. Med.306:1009-1012.

23. Zissis, G., J. P. Lambert, J. Fonteyne และ D. DeKeyel. 1976. การถ่ายทอดโรตาไวรัสจากแม่สู่ลูก? Lancet i:96.